Sobre a técnica de imunofluorescência, considere:
Protocolo de Imunofluorescência
Etapas
1- Permeabilizar com 0,5% Triton X-100, 10 minutos.
2- Incubar com anticorpo mouse, overnight a 4 °C.
3- Incubar com anticorpo anti-mouse, 2 horas.
4- Tratar com a enzima RNAse, 30 minutos.
5- Corar DNA: adicionar 20 μL de iodeto de propídeo, 20 minutos.
I. A técnica apresentada no quadro é do método direto, utiliza um anticorpo primário, conjugado com substância
fluorocrômica, contra um determinado antígeno para detectar sua localização na amostra.
II. A técnica apresentada no quadro é do método indireto, utiliza um anticorpo secundário, marcado com substância
fluorocrômica, dirigido contra o anticorpo primário que reage com um determinado antígeno.
III. Na etapa 3, deve-se incubar a amostra com anticorpo marcado com a substância fluorocrômica fluoresceína (FITC), que
emite fluorescência de cor verde.
IV. Na etapa 3, deve-se incubar a amostra com anticorpo marcado com a substância fluorocrômica rodamina (TRICT), que
emite fluorescência de cor vermelha.
V. Na etapa 5, o marcador fluorescente iodeto de propídeo se intercala à estrutura de qualquer DNA da amostra, desde que
a membrana celular esteja permeável, e emite fluorescência de cor vermelha.
Está correto o que se afirma APENAS em