A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica
que foi aperfeiçoada ao longo de décadas, tornando possível
a amplificação seletiva de sequências de DNA de pacientes.
É utilizada como um instrumento de análise de rotina
nos laboratórios de diagnósticos e pesquisa. O princípio
dessa técnica é
A amplificar regiões específicas do genoma ou de
transcritos por meio de repetições das etapas de
desnaturação, anelamento e polimerização, em média
de 20 a 30 ciclos. A etapa de polimerização é realizada
pela adição de enzima DNA polimerase após
cada ciclo de desnaturação.
B possibilitar, em tempo real (qPCR), o acompanhamento
da amplificação do DNA em todo o processo e
não somente no final. Para que isso ocorra, as etapas
obedecem à seguinte ordem: desnaturação, anelamento,
polimerização e transcrição reversa.
C permitir a hibridização in situ por fluorescência, cujas
etapas ocorrem na seguinte ordem: desnaturação, anelamento
ou hibridização, extensão ou polimerização.
D amplificar segmentos previamente definidos da molécula
de DNA, sendo necessária a síntese de iniciadores
específicos que amplificam o fragmento desejado
a cada ciclo, que compreende três etapas: desnaturação,
hibridização e extensão.