A fim de garantir a homogeneidade e a reprodutibilidade da
experimentação envolvendo culturas celulares, é necessário
que, antes da utilização de células para montagem de
experimentos, seja realizada a contagem das mesmas.
Todas as afirmativas abaixo se relacionam ao procedimento
correto de contagem e ao cálculo do número de células em
uma suspensão, exceto uma . Assinale-a.
A Com o objetivo de que sejam contadas somente as
células viáveis em uma suspensão celular, antes de
pipetar esta suspensão na câmara de Neubauer, esta é
colocada em contato com uma solução de Azul de
Tripan. Somente as células vivas excluem o corante vital
azul de tripan, logo as células não viáveis poderão ser
distinguidas das demais por apresentarem coloração
azul.
B O procedimento de contagem de células é equivalente
tanto para células aderentes quanto para células
cultivadas em suspensão, a única diferença é na
preparação das células, enquanto as primeiras devem ser
inicialmente tripsinisadas, as segundas devem ser
somente homogeneizadas.
C Após misturar-se volumes iguais de uma suspensão
celular e de uma solução de azul de tripan a 1%, realizou-se
a contagem de células nos quatro quadrados dos
cantos do grid . Após a exclusão das células não viáveis,
obteve-se um total de 150 células. Logo, a concentração
destas células na suspensão original é 3,75 × 105
células/mL.
D A contagem das células é realizada após a pipetagem de
um pequeno volume da suspensão celular em uma
lâmina de vidro especial denominada câmara de
Neubauer. A parte central desta câmara é dividida em
duas superfícies separadas, cada uma dividida em um
grid composto por nove quadrados, cada um com 1mm
de lado. Antes de se colocar a suspensão de células a
parte central da câmara é coberta por uma lamínula,
formando um espaço entre a câmara e a lamínula de
0,1mm. Logo o volume determinado para cada quadrado
é igual a 0,1mm3
.
E Na contagem das células, pode-se utilizar o quadrado
central ou os quatro quadrados dos cantos de 1 grid .
Quando utilizar os quatro quadrados dos cantos, o valor
da contagem deve ser a média das contagens de cada
um dos quadrados.