A quantificação de carga viral por PCR em tempo...

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Ano: 2010Banca: FGVOrganização: FIOCRUZDisciplina: Biomedicina: Análises ClínicasTemas: Biologia Molecular Aplicada à Biomedicina

A quantificação de carga viral por PCR em tempo real se dá pela:

retrotranscrição de RNA viral fita simples em DNA complementar fita simples por meio de uma reação de RT-PCR ao mesmo tempo que uma transcriptase reversa sintetiza a fita complementar de DNA e uma RNase H degrada o RNA molde em uma reação isotérmica. O produto serve como molde para que a RNA polimerase T7 sintetize fitas únicas de RNA e reinicie o ciclo. Para a detecção uma sonda se liga ao produto da reação e libera fluorescência que pode ser medida por um fluorímetro.

detecção de material genético DNA ou RNA por complementaridade específica com cadeias curtas de oligonucleotídeos específicos. Tais cadeias também se complementam com sondas que contém múltiplas moléculas de DNA acopladas, desenhadas para se complementar com uma sonda que emite luminescência. A quantificação da luz é proporcional a quantidade de RNA viral.

pela detecção de apenas RNA viral por complementaridade específica com cadeias curtas de oligonucleotídeos específicos. Tais cadeias também se complementam com sondas que contém múltiplas moléculas de DNA acopladas, desenhadas para se complementar com uma sonda que emite ondas de radiação. A quantificação da radiação é proporcional a quantidade de RNA viral.

réplica de uma reação de PCR normal, mas com uma sonda específica para o RNA viral molde que quando dissociada pela ação da Taq polimerase libera fluorescência que é detectada por um laser à medida que a Taq polimerase sintetiza novas moléculas de DNA. A quantidade de fluorescência captada é diretamente proporcional à quantidade de DNA sintetizado que por sua vez é proporcional à quantidade de RNA viral molde.

réplica de uma reação de PCR normal, mas com uma sonda específica para o DNA viral molde que quando dissociada pela ação da Taq polimerase libera fluorescência que é detectada por um laser à medida que a Taq polimerase sintetiza novas moléculas de DNA. A quantidade de fluorescência captada é diretamente proporcional à quantidade de DNA sintetizado, que por sua vez é proporcional à quantidade de DNA viral molde.

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Ano: 2010Banca: FGVOrganização: FIOCRUZDisciplina: Biomedicina: Análises ClínicasTemas: Biologia Molecular Aplicada à Biomedicina

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