O subcultivo da maioria das células aderentes envolve a
utilização da protease tripsina e do sal EDTA. Sobre o motivo
da utilização destes reagentes no procedimento de
subcultivo celular, analise as afirmativas a seguir.
I. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras pelas proteínas que compõe a
matriz extracelular. Enquanto a tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas, a função do EDTA é
quelar os íons Ca2+, que são requeridos para a ligação
célula-célula mediada pelas caderinas. Desta forma, tanto
o EDTA quanto a tripsina servirão para promover o
destacamento das células do frasco de cultivo e sua
separação.
II. As células são cultivadas geralmente na presença de soro
que fornece fatores de crescimento necessários para a
divisão celular. A fim de realizar o subcultivo é necessário
eliminar o soro presente no meio. A tripsina irá clivar as
proteínas do soro e o EDTA facilitará a formação de
agregados protéicos que serão facilmente removidos ao
se descartar este meio, promovendo assim a retirada do
soro do meio de cultivo.
III. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras através das proteínas que
compõe a matriz extracelular. A tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas e a função do EDTA é
servir de co-fator para a tripsina aumentando sua
atividade. Desta forma, promovendo o destacamento das
células do frasco de cultivo e sua separação.