Atualmente, a PCR em Tempo Real é uma das técnicas mais
utilizadas para diferentes diagnósticos e exames como: identifcação de agentes infecciosos, alterações dos cromossomos, determinação de paternidade, genealogia, identificação de pessoas
ou amostras, síndromes genéticas, propensão a doenças (testes
prediƟ vos) etc. Sobre esta técnica para a fi nalidade diagnóstica
é INCORRETO afirmar que:
A ensaios PCR em Tempo Real quantativo baseados em reação
multiplex permitem não só que mais de um alvo de interesse
seja analisado na mesma reação, como também possibilita
adicionar um controle interno, o qual validará individualmente cada reação
B ensaios PCR em Tempo Real quantativo são muito mais
sensíveis, específicos e rápidos, principalmente quando
comparados aos testes convencionais.
C para garantir o estabelecimento de um teste de PCR em
Tempo Real multiplex que seja reprodutível e sensível, é
extremamente importante a padronização da reação, uma
vez que diferentes alvos estarão competindo pelos íons de
magnésio (cloreto e acetato), enzimas e dNTPs.
D a plataforma de PCR em tempo Real é composta por um
termociclador, sistema óptico para excitação do fluoróforo
e coleta de emissão (filtros de excitação e detecção), computador e sotware com capacidade de adquirir, armazenar
e analisar os resultados.
E para todos os sistemas de PCR em Tempo Real, deve-se levar em consideração o background com multicomponente
gerado para cada amplificação. Este ruído pode interferir
no resultado final, sendo apenas causado por: degradação
inespecíficada sonda, fluorescência residual do fluoróforo
e diferenças na transparência dos tubos/placa.