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A coloração de Gram é a mais utilizada em laboratório de microbiologia, pois permite a visualização e diferenciação das bactérias em função da estrutura de sua parede e também da morfologia. A técnica adequada é realizada em várias etapas, conforme descrito a seguir:
I. Cobrir o esfregaço com a solução de iodo (LUGOL) durante cerca de um minuto.
II. Cobrir o esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de um minuto.
III. Cobrir o esfregaço com a solução de safranina (ou Fucsina básica 0.1% a 0.2%), por cerca de 30 segundos.
IV. Decantar o cristal-violeta e lavar suavemente com a própria solução de iodo ou água da torneira.
V. Descorar a lâmina com álcool ou com a mistura álcool-acetona (1:1), até que o solvente escorra incolor.
VI. Lavar com água corrente (jato fraco).
VII. Deixar secar ao ar, em temperatura branda (até 50 ºC).
A sequência correta das etapas está descrita em: