Um pesquisador isolou e sequenciou, a partir de um animal, um pequeno peptídio com atividade de interesse. Embora descon...

Partindo o RNA total do animal, o pesquisador poderia construir uma biblioteca de cDNAs, fazer a triagem com sonda radioativa e sequenciar todos os clones positivos, a fim de obter a sequência de nucleotídios desejada. A partir de então, ele deveria isolar o clone positivo e transformá-lo diretamente em bactérias que permitissem a expressão do peptídio de interesse.

Considerando que o pesquisador disponha de bibliotecas de cDNA de vários tecidos animais, e que ele possa utilizar o peptídio isolado para gerar anticorpos, ele poderia realizar uma triagem com anticorpos marcados para saber em qual tecido o seu peptídio é mais expresso. A partir de então, o pesquisador poderia isolar seu peptídio de interesse do tecido que mais o expressasse, sem riscos de obtenção de falsos produtos.

O pesquisador poderia aplicar a técnica de RT-PCR da seguinte forma: utilizar radom primers na síntese de cDNA; depois, utilizar primers degenerados para a PCR; finalmente, clonar o amplicon assim obtido em vetores de expressão para obter seu peptídio de forma correta.

Por se tratar de pequeno peptídio, provavelmente resultante de clivagem, técnicas moleculares estão limitadas. O pequeno tamanho facilita o aparecimento de diversos falsos positivos, se feita a triagem de bibliotecas de cDNA; enquanto que a tradução seguida de clivagem é um processo que não pode ser feito in vitro.

Por se tratar de um peptídio (ou seja, uma sequência relativamente pequena), é possível que a triagem de uma biblioteca de cDNA com anticorpos não seja bem-sucedida, apresentando muitos falsos positivos e falsos negativos.