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Existem diversas técnicas e metodologias utilizadas em microbiologia para identificação de diferentes bactérias. A chamada técnica de Gram é uma rotineiramente usada. Os itens I, II e III referem se a essa técnica.
I. todo o esfregaço, antes de ser submetido a coloração, deverá estar seco (exposto ao ar),podendo ser fixado com calor brando (aproximadamente, 50ºC). A fixação excessiva e o superaquecimento irão distorcer amorfologia celular e a fixação insuficiente permitirá a saída do material durante o processo decoloração. Deixar a lâmina esfriar antes de iniciar a coloração.
II. o álcool etílico a 95% atua como agente descolorante lento ou na mistura álcool etílico a 95% e acetona (v/v) atua como agentedescolorante intermediário, neste caso exige maior habilidade por parte do operador para que não ocorra hiperdescoloração.
III. as bactérias Gram-negativas retêm o cristal-violeta e se apresentam com coloração violetaenquanto as Gram-positivas são descoradas pelo álcool-acetona, sendo, portanto, coradas com ocorante de fundo (fucsina) e se apresentam róseas.
Sobre os itens I, II e III é correto afirmar: