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No que diz respeito às reações de polimerização em cadeia (PCR) e suas características, julgue as afirmativas, considerando “V” para as verdadeiras e “F”, para a falsas:
( ) A PCR é uma técnica que envolve a síntese enzimática in vitro de sequências DNA alvo as quais são duplicadas a cada ciclo criando uma reação em cadeia, pois cada molécula sintetizada pode servir de molde para o próximo ciclo.
( ) Entre os componentes básicos de uma reação de PCR estão o DNA molde, a enzima Taq DNA polimerase, co-fatores enzimáticos (MgCl2), tampão enzimático (condições salinas e de pH), deoxi Nucleotídeos Trifosfatos (dNTPs), e os iniciadores (primers). As classes RAPD, SSR, RFLP e VNTR são primers utilizados em protocolos de PCR para a geração de marcadores moleculares.
( ) Um ciclo de PCR ocorre em três fases: a desnaturação, que geralmente ocorre com temperatura de 94° C, a qual favorece a separação das duas fitas do DNA pelo rompimento das pontes de hidrogênio; o anelamento de primers, realizado em temperatura entre 35 a 65° C, dependendo das peculiaridades da técnica (primer); e a extensão, geralmente em temperatura de 72° C, que é a temperatura ótima para a atividade da enzima Taq DNA polimerase.
( ) A temperatura utilizada na fase de anelamento dos primers exerce controle sobre a severidade (stringency) do pareamento dos nucleotídeos. Temperaturas menores (tendendo para 35° C) exigem maior especificidade no pareamento do primer com o DNA alvo, enquanto que temperaturas maiores (tendendo para 65° C) exigem menor especificidade no pareamento do primer com o DNA alvo.
( ) Além da molécula do DNA, o RNA também pode ser amplificado, desde que ele seja primeiramente convertido para fita dupla (cDNA), através da atuação da enzima DNA polimerase transversa.
( ) O conteúdo GC do primer é um dos fatores que interferem na temperatura de anelamento, sendo que, no geral, o maior conteúdo de G e C compondo o primer contribui para o aumento da temperatura de anelamento a ser utilizada nessa fase no ciclo da PCR.